Флуоресцентный микроскопический анализ жизнеспособности ооцитов млекопитающих после витрификации

Жизнеспособность ооцитов крупного рогатого скота и свиней после витрификации изучена при помощи флуоресцентной микроскопии. Замораживание яйцеклеток осуществлялось в средах для витрификации с разной концентрацией криопротекторов в несколько этапов с последующей витрификацией. После хранения в криобанке в течение 14 дней опытные образцы были разморожены и проведен анализ жизнеспособности ооцитов с помощью морфологической оценки ооцитов и флуоресцентной микроскопии. Для окрашивания ооцитов были использованы два специальных набора: на некроз/апоптоз клеток (Propidium iodide/Alexa Fluor 488 Annexin) и на живые/мертвые клетки (Calcein-AM/ethidium homodimer-1). Флуоресцентная микроскопия ооцитов свиней и коров показала, что для оценки жизнеспособности ооцитов следует использовать флуоресцентный краситель Calcein-AM, поскольку флуоресцентные красители Propidium iodide и ethidium homodimer-1 не отображают процесс клеточной смерти яйцеклеток. В связи с этим Propidium iodide и ethidium homodimer-1 не могут выступать индикаторами истинной гибели ооцитов.