Изучение взаимодействия различных форм глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы с шаперонином Hsp 70

С помощью твердофазного иммуноферментного анализа и иммобилизации одного из партнеров на сефарозе было исследовано взаимодействие различных форм глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) с шаперонином Hsp 70. Разработанная система очень удобна для анализа взаимодействия шаперона Hsp 70 с ГАФД (и, возможно, с другими белками-мишенями), а также для изучения влияния различных эффекторов на это взаимодействие. Этот подход не требует большого количества белков и лигандов и легко автоматизируется. Было показано, что ни одним из этих методов не удается обнаружить связывания нативной ГАФД с шаперонином Hsp 70. При этом добавление субстратов и кофакторов ГАФД или переведение фермента в ацилированную форму также не приводит к индукции связывания шаперонина Hsp 70. Денатурированные формы ГАФД, полученные путем диссоциации на субъединицы в воде или адсорбцией на планшете, эффективно взаимодействуют с шапероном Hsp 70. Обнаружено также связывание денатурированной ГАФД, ассоциированной с сефарозой, с растворимым шапероном Hsp 70. Таким образом, нами было установлено, что только денатурированные формы ГАФД могут взаимодействовать с шапероном Hsp 70 и предотвращать его участие в разрушении амилоидных структур (например, агрегатов хантингтина).